293、CHO细胞高表达蛋白瞬转套装(PEI法)

一、简介

GenVaxell 293、CHO细胞瞬转表达基础培养基 （Basal Medium） 与补料培 养 基 （Feed Medium） 是 完 全 化 学 成 分 限 定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何动物来源的成分，适合于不同亚型293细胞 （expi293和293T细胞等） 和不同亚型中国仓鼠卵巢细胞 （CHO-K1和CHO-S细胞） 的高密度悬浮培养，可实现重组蛋白和抗体的高水平表达：293细胞培养 7天表达量在 1000 mg/L左右；CHO细胞培养 7天表达量在 500 mg/L 左右，14 天表达量 1000 mg/L左右，部分可达2 g/L以上。

二、产品描述

三、产品运输及存储

运  输：常温或冷链运输；
存  储：2~8℃，干燥、避光保存；
有效期：基础培养基干粉：2年；
             基础培养基液体：1年；补料培养基干粉：2年；
             补料培养基液体：1年（开封后建议在3个月内使用完）。

四、应用范围

      GenVaxell无血清培养基可用于293细胞及CHO细胞冻存、复苏、传代、高密度强化工艺培养及灌流培养，可实现细胞快速生长，维持细胞高活率及蛋白高表达。

五、使用指南

细胞冻存:

1．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在90%以上；
2．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度1~1.5×10⁷cells/mL；
3．准备好所需的冻存培养基：90%基础培养基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；
4．设置离心力200×g，离心5 min，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；
5．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；
6．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；
7．将细胞转移到液氮罐中保存。

细胞复苏:

1．提前打开水浴锅，并设置温度至36.5℃~37.0℃；
2．将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中融化冷冻的细胞（＜3 min）；
3．将冷冻管中的细胞液全部转移到125 mL含有30 mL预温过的基础培养基的摇瓶 中；
4．置于36.5~37.0℃，5~8% CO₂   转速120 rpm（轨道振幅50 mm）的摇床中培养；
5．细胞至少传代2次，待细胞完全复苏且活率在90%以上，可按计划进行后续操作。

细胞传代:

1．将基础培养基放入36.5~37.0℃条件下预热20 min；
2．检测活细胞密度，按接种密度为0.3×10⁶ cells/mL的最终传代体积，计算所需种子液量；
3．无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的基础培养基的摇瓶中；
4．将摇瓶放入温度36.5~37.0℃，120 rpm （振幅50 mm）（摇瓶底面积增大，需减小摇床转速），5%~8% CO₂的细胞培养摇床中进行培养；
5．每3天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。

六、测试数据