人 / 动物疫苗培养基
一、简介
GenVaxell 人 / 动物疫苗基础培养基 （Basal Medium） 是完全化学成分限定（Chemically Defined），均不含血清、水解物及任何动物来源的成分，可实现病毒
高滴度表达。
二、产品描述
三、运输及存储
运输：常温或冷链运输；
存储：2~8℃，干燥、避光保存；
有效期：基础培养基干粉：2年；
基础培养基液体：1年；
四、使用指南
GV VP SFM01
细胞传代：
1．将基础培养基放入37.0℃条件下预热20 min；
2．取细胞汇合度80~90%，镜检无菌的细胞进行传代。
3．去掉培养液，用10 mL（以T75为例）常温的DPBS 润洗一遍，吸弃DPBS。
4．加入~2 mL （以T75为例） 温和消化酶，37℃消化3~5 min至细胞开始变圆脱落。
5．加入预热过的GV VP SFM01培养基覆盖培养瓶底部表面，终止消化，轻轻吹散细胞并收集。
6．取样计数，以~1万/cm2 个细胞或 1:5~1:10接种，补充 GV VP SFM01培养基至15~20 mL（以T75为例）。
7．置于 36.5~37℃，5% CO2 饱和湿度的培养箱培养，一般 2~4天达到 80~90%汇合度。
细胞冻存：
1．取汇合度80~90%，活率大于90%，镜检无菌的细胞冻存。
2．配制冻存培养基：配比为90% GV VP SFM01培养基+10% DMSO。
3．细胞使用温和消化酶消化，终止消化后，200×g离心5 min，弃去上清。
4．使用冻存培养基重悬细胞：重悬后控制活细胞密度为5×106 cells/mL。
5．将重悬液保存于适宜规格的冻存管中。
6．使用程序降温仪或冻存盒等方式进行降温冻存处理， 建议降温速率为1℃/min（-80℃保存过夜即可）。
7．将细胞转移至液氮罐中保存。
细胞复苏：
1．将冻存管快速置于37℃水浴中，融化冷冻的细胞，待细胞融化时立马取出至洁净工作台。
2．将细胞悬液转入含有10 mL预热过的GV VP SFM01培养基的离心管中，200× g离心5 min，弃上清。
3．使用15~20 mL预热过的GV VP SFM01培养基重悬细胞，并转移至具有透气盖的T75方瓶中。
4．将T75方瓶放置于36.5~37℃，5% CO2 饱和湿度的培养箱中培养。
五、测试数据
图1 细胞传代
图2 批次培养
图3 病毒生产
细胞能够快速适应GenVaxell无血清培养基，细胞在GV VP SFM01中与进口培养基生长基本无差异，在 GV VP SFM02中细胞生长更快。
接毒后 GV VP SFM01与 GV VP SFM02培养基产毒无差异，且都明显优于进口培养基。
GV BP SFM01
备注：高密度接种工艺,在收获时细胞离心前可加入0.1%的20%的聚二烯二甲基氯化铵溶液，然后和细胞一起高速离心，可提高后续过滤载量接近10倍，显著降低浊度。
细胞复苏
1．提前打开水浴锅，并设置温度至37.0℃；
2．将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中融化冷冻的细胞（＜3 min）；
3．将冷冻管中的细胞液全部转移到125 mL含有30 mL预温过的基础培养基的摇瓶中；
4．置于37.0℃，5~8% CO2 转速120 rpm（轨道振幅50 mm）的摇床中培养；
5．细胞至少传代2次，待细胞完全复苏且活率在90%以上，可按计划进行后续操作。
细胞传代
1．将基础培养基放入36.5~37.0℃条件下预热20 min；
2．检测活细胞密度，按接种密度为0.5×106 cells/mL的最终传代体积，计算所需种子液量；
3．无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的基础培养基的摇瓶中；
4．将摇瓶放入温度36.5~37.0℃，120 rpm （振幅50 mm）（摇瓶底面积增大，需减小摇床转速），5%~8% CO2的细胞培养摇床中进行培养；5．每2天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。
细胞冻存
1．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在90%以上；
2．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度 2~3×107cells/mL；
3．准备好所需的冻存培养基：90%基础培养基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；
4．设置离心力200×g，离心5 min，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；
5．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；
6．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；
7．将细胞转移到液氮罐中保存。
测试数据
实例：
细胞能够快速适应晶珂 GV BP SFM01 培养基，0.5×106 cells/mL 传代 2 次后，在48 h内增长至6×106 cells/mL以上，生长速率明显高于其他培养，极大的缩短了工艺时间。
GV MP SFM01
备注：高密度接种工艺,在收获时细胞离心前可加入0.1%的20%的聚二烯二甲基氯化铵溶液，然后和细胞一起高速离心，可提高后续过滤载量接近10倍，显著降低浊度。
细胞复苏
1．提前打开水浴锅，并设置温度至37.0℃；
2．将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中融化冷冻的细胞（＜3 min）；
3．将冷冻管中的细胞液全部转移到125 mL含有30 mL预温过的基础培养基的摇瓶中；
4．置于37.0℃，5~8% CO2 转速120 rpm（轨道振幅50 mm）的摇床中培养；
5．细胞至少传代2次，待细胞完全恢复且活率在90%以上，可按计划进行后续操作。
细胞传代
1．将基础培养基放入37.0℃条件下预热20 min；
2．检测活细胞密度，按接种密度为1.0×106 cells/mL的最终传代体积，计算所需种子液量；
3．无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的基础培养基的摇瓶中；
4．将摇瓶放入温度37.0℃，120 rpm （振幅50 mm）（摇瓶底面积增大，需减小摇床转速），5%~8% CO2的细胞培养摇床中进行培养；
5．每2~3天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。
细胞冻存
1．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在90%以上；
2．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度 2~3×107cells/mL；
3．准备好所需的冻存培养基：90%基础培养基+10% DMSO，2~8℃冷藏保存；
4．设置离心力200×g，离心5 min，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；
5．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；
6．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；
7．将细胞转移到液氮罐中保存。
测试数据
图1 细胞传代
图2 病毒生产批次培养
图3 滴度检测结果
GenVaxell 培养基细胞生长较 快 ， 在 细 胞 传 代 及 批次 生 产 培 养 中 与 对 照 差异明显。
病毒表达量 GenVaxell 培养基可达到 2×1012，明显优于对照。
图4 滴度检测结果
细胞能够快速适应晶珂GV MP SFM01培养基，0.5×106 cells/mL传代2~3次后，在48 h内增长至6×106 cells/mL以上，生长速率明显高于其他培养，极大的缩短了工艺时间。
GV IP SFM01
备注：晶珂生物昆虫培养基可用于昆虫细胞冻存、复苏、传代、高密度悬浮培养可实现细胞快速生长，支持病毒与蛋白高表达。
细胞冻存
1．准备处于对数生长期状态较好的细胞，且细胞活率在90%以上；
2．检测活细胞密度，计算所需的冻存培养基体积，计算最终细胞密度1~1.5×107cells/mL；
3．准备好所需的冻存培养基：80%基础培养基+10% DMSO+10%昆虫培养上清，2~8℃冷藏保存；
4．设置离心力200×g，离心5 min，用冻存培养基重新悬浮细胞至冻存体积；
5．将悬浮细胞等分保存至适宜规格的细胞冻存管中；
6．将细胞冻存管置于程序降温盒中，按照降温标准进行降温；
7．将细胞转移到液氮罐中保存。
细胞复苏
1．提前打开水浴锅，并设置温度至36.5℃~37.0℃；
2．将细胞从液氮罐中移出后，快速在水浴锅中快速融化冷冻的细胞 （＜2 min，控制冻存管中有少量冰块，避免温度过高细胞死亡）；
3．将冷冻管中的细胞液全部转移到125 mL含有30 mL预温过的基础培养基的摇瓶中；
4．置于~27.0℃，转速120 rpm（轨道振幅50 mm）的摇床中培养；
5．细胞至少传代2次，传代密度1E6 cells/mL; 待细胞完全复苏且活率在90%以上，可按计划进行后续操作。
细胞传代
1．将基础培养基放入~27.0℃条件下预热20 min；
2．检测活细胞密度，按接种密度~1.0×106的最终传代体积，计算所需种子液量；
3．无菌转移所需量的种子液，添加至含所需体积的已预热的基础培养基的摇瓶中；
4．将摇瓶放入温度~27.0℃，110~120 rpm （振幅50 mm）（摇瓶底面积增大，需减小摇床转速）的细胞培养摇床中进行培养；
5．每2~3天用新鲜的培养基按上述步骤进行传代培养。
测试数据
实例：昆虫细胞生长
