GenVaxell 病毒滴度检测试剂盒（慢病毒包装专用）

 GenVaxell 慢病毒滴度检测产品分为快速检测卡与ELISA检测试剂盒两类：

• 快速检测卡：基于胶体金侧向层析技术的HIV-1 P24 蛋白半定量检测卡，可以用于相关慢病毒载体和假病毒包装效率的快速评估，10~15分钟出结果；

• 产品名称	货号	规格
  慢病毒滴度快速检测卡(病毒包装专用)	GVV 06202	10条/100条
  慢病毒滴度快速检测卡(高敏版)	GVV 06206	10条/100条

操作步骤：

1. 打开包装取出检测卡，平放在生物安全柜台面上；

2. 用微量移液器吸取20 细胞培养上清，滴加到样品窗（S） 中；再加入50 μl缓冲液；

3. 静止10-15 min 后即可判读结果。

结果判读：

1. 在检测窗中，质控线（C） 和检测线（T） 均显色即为阳性；

2. 质控线（C） 显色，检测线（T） 不显色，检测结果为阴性；

3. P24 含量请根据比色卡进行判断；（如果T 颜色过深，可以稀释样品重测）

4. 质控线（C） 不显色，无论检测线（T） 是否显色，检测无效。

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• ELISA检测试剂盒：采用双抗体夹心法测定HIV-1 P24 蛋白，即将抗HIV-1 P24 的单克隆抗体包被于微孔板，待测样本加入已包被的反应孔内孵育，若标本中含有HIV-1 P24 蛋白，则该蛋白与孔内的抗体形成抗原抗体复合物，加入酶标抗HIV-1 P24 单抗，孵育后，酶标抗体与抗原抗体复合物上的抗原结合，再与底物反应显色。最后用硫酸终止反应，用酶标仪测定OD 值。

  产品名称	货号	规格
  慢病毒滴度ELISA检测试剂盒	GVV 06203	96T
  慢病毒滴度ELISA检测试剂盒(一步法)	GVV 06224	96T

• 操作步骤：

1. 配液：将30 ml 浓缩洗涤液（20 倍） 用蒸馏水稀释至600 ml；或取适量浓缩液按需配制成1X洗涤液。

2. 定量HIV-1 P24 系列稀释：阳性对照（PC） 含有6.4 ng/ml 的重组HIV-1 P24 抗原，用完全DMEM 或者1X 洗涤液梯度系列稀释六个浓度的阳性对照（稀释方法见下表），每个稀释浓度做两个复孔，并对应的使用完全DMEM 或者1X 洗涤液稀释待测样本。

   

3. 编号：将样品对应孔按序编号，每板应设阴性对照共计四孔（建议四孔，最少两孔）、阳性对照每个梯度各两孔。其中阴性对照即您步骤2 中稀释待测样本及阳性对照的溶液，其中阳性对照即为表1 中您梯度稀释的六管HIV-1 p24 抗原。

4. 将25 裂解液加入到反应孔中。

5. 将75 待测样品或对照品加入到反应孔中。

6. 将75 酶结合物加入到反应孔中。振荡30-60 秒混匀，置37℃孵育50 分钟。

7. 洗板5 次，拍干后每孔加入单组分TMB 底物100 /孔。置37℃孵育10 分钟。

8. 加入终止液50 孔，振荡30-60 秒混匀，OD 值在1 h 内能够稳定。

9. 用酶标仪读数，波长450 nm(建议使用双波长酶标仪，参考波长630 nm)。